產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品型號：

廠商性質(zhì)：經(jīng)銷商

訪問量：923

更新時間：2024-11-05

本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！

產(chǎn)品名稱：人骨髓造血干細胞

組織來源：骨髓

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、SCF、IL-3、TPO、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：懸浮

細胞形態(tài)：圓形

傳代特性：不建議傳代

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人骨髓造血干體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞簡介：

人骨髓造血干分離自骨髓；骨髓是機體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用，白細胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細菌、病毒等；某些淋巴細胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細胞增多，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。造血干細胞具有自我更新能力并能分化為各種血細胞的前提細胞，終生成各種血細胞成分，包括紅細胞，白細胞和血小板。造血干細胞需要根據(jù)機體的生理需求適時的補充血液系統(tǒng)各個成熟細胞組分。同時在損傷、炎癥等應激狀態(tài)下，造血干細胞也扮演著調(diào)節(jié)和維持體內(nèi)血液系統(tǒng)各個細胞組分的生理平衡的角色。臨床治療中，造血干細胞移植廣泛應用于血液系統(tǒng)疾病以及自身免疫疾病，在其它實體瘤的治療中，比如淋巴瘤，生殖細胞瘤，乳腺癌，小細胞肺癌，主要應用于常規(guī)治療失敗或復發(fā)難治以及具有不良預后因素的患者。造血干細胞以不對稱有絲分裂方式進行增殖，一個干細胞分裂產(chǎn)生兩個子細胞，一個分化為造血祖細胞，另一個則保持干細胞特征。造血干細胞在不斷體外培養(yǎng)產(chǎn)生大量造血祖細胞同時，保持自己既不增殖也不分化。體外培養(yǎng)微環(huán)境合適，造血干細胞可持續(xù)維持培養(yǎng) 60 天左右。 造血干細胞體外增殖培養(yǎng)需要基質(zhì)細胞滋養(yǎng)（滋養(yǎng)層細胞），缺少滋養(yǎng)層細胞不增殖，無法長期培養(yǎng)，本產(chǎn)品為收集培養(yǎng)好的造血干懸浮細胞灌裝發(fā)貨，不包含滋養(yǎng)層，因此收貨后建議盡快實驗。

方法簡介：

實驗室分離的人骨髓造血干采用沖洗骨髓、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的人骨髓造血經(jīng)CD34免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

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