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貂環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA檢測試劑盒實驗原理

日期:2022/3/4瀏覽:650次

貂環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA檢測試劑盒說明書

 

優(yōu)勢:

1、原裝jin口抗體----高效、靈敏、特異性好

2、規(guī)范包被操作----吸附均勻、吸附性好、空白值低、孔底透明度高

3、先進的優(yōu)化方案----重復性高,可靠性強

4、高標準技術(shù)服務要求:靈敏度高,特異性強 

5、適用范圍廣:血漿、血清、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等多種類型的樣本

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被組胺(HIS)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的組胺(HIS)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

貂環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA檢測試劑盒樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

酶標儀(450nm)

高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

37℃恒溫箱

操作注意事項

  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

  所有液體組分使用前充分搖勻。

貂環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA檢測試劑盒試劑盒組成

名稱96孔配置48孔配置備注

微孔酶標板12孔×8條12孔×4條

標準品0.3mL*6管0.3mL*6管

樣本稀釋液6mL3mL

檢測抗體-HRP10mL5mL

20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋

底物A6mL3mL

底物B6mL3mL

終止液6mL3mL

封板膜2張2張

說明書1份1份

自封袋1個1個

注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、12.5、25、50、100、200 mg/L

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

  手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

 繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

 

貂環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA檢測試劑盒試劑盒性能

 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

 靈敏度:低檢測濃度小于1.0 mg/L。

 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

 重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

 有效期:6個月

免責聲明

  試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

  嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。

 

 

 

 

 


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