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白介素27ELISA試劑盒的使用還是很有必要了解的

日期:2023-06-28瀏覽:546次

  白介素27ELISA試劑盒是一種常用于檢測白介素27(IL-27)濃度的實驗工具。IL-27是一種細(xì)胞因子,它在免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)和抗腫瘤免疫等方面具有重要作用。因此,了解IL-27的濃度變化對于治療各種疾病具有重要意義。
  白介素27ELISA試劑盒的使用流程:
  1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在第、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在第、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從第孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180ng/L,120ng/L,60ng/L,30ng/L,15ng/L)。
  2、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  3、溫育:用封板膜封板后置38℃溫育30分鐘。
  4、配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
  5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  6、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
  7、溫育:操作同3。
  8、洗滌:操作同5。
  9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
  11、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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